תוֹכֶן
- ההבדל העיקרי
- רקמת דרום לעומת. סופג מערבי
- טבלת השוואה
- מה זה כתם דרומי?
- מה זה Western Blotting?
- הבדלים עיקריים
- סיכום
ההבדל העיקרי
ההבדל העיקרי בין הקרישה הדרומית לבין הקרישה המערבית הוא שקרישת הדרום היא טכניקה המשמשת לאיתור שבר DNA ספציפי במדגם נתון ואילו Western Blotting משמשת לגלות חלבון ספציפי במדגם נתון.
רקמת דרום לעומת. סופג מערבי
כתמים היא טכניקה המשמשת מדענים להפרדת סוגים שונים של מולקולות מתערובת או מדגימה. בטכניקה זו, מקרומולקולות כמו חומצות גרעין (DNA ו- RNA) וחלבונים בתערובת עוברים דרך לוח ג'ל. כאן חלקיקים דקים ינועו מהר יותר מהחלקים הגדולים יותר. מולקולות אלה נלחצות אל פני השטח של ממברנה לא מוגבלת המעבירה את המולקולות אל הממברנה. ישנם סוגים שונים של קרישת דם על בסיס איתור של חומר ספציפי, כלומר כתמים דרומיים, כתמים צפוניים, וקרישה מערבית. הקרישה הדרומית היא סוג הקרישה המשמש לגילוי DNA ואילו הקרישה המערבית משמשת לגילוי חלבון. הקרישה הדרומית פותחה על ידי אדוארד מ 'דרום בשנת 1975. לכן, זה ידוע בשם כתם דרומי. לעומת זאת, הקרישה המערבית פותחה על ידי הקבוצה של ג'ורג 'סטארק באוניברסיטת סטנפורד בשנת 1979. שם זה שימש כדי להתאים לכתמים הדרומיים. כתמים דרומיים משמשים כדי לגלות רצף DNA ספציפי ואילו, כתמים מערביים משמשים כדי לגלות חומצת אמינו או רצף חלבון ספציפי.
טבלת השוואה
| רקמת דרום | סופג מערבי |
| טכניקה המשמשת כדי לגלות רצף DNA ספציפי בתערובת נתונה מכונה כתמים דרומיים. | טכניקה המשמשת לגלות רצף של חומצות אמינו ספציפיות של החלבון בתערובת נתונה מכונה נקישות דרומית. |
| פותח על ידי | |
| הקרישה הדרומית פותחה על ידי אדוארד מ 'דרום בשנת 1975. | הקרישה המערבית פותחה על ידי הקבוצה של ג'ורג 'סטארק באוניברסיטת סטנפורד בשנת 1979. |
| סוג הגילוי | |
| כתמים בדרום משמשים כדי לגלות רצף DNA ספציפי. | כתמים מערביים משמשים כדי לגלות חומצה אמינית או רצף חלבון ספציפי. |
| עקרון | |
| זה עובד על עיקרון ההכלאה. | זה עובד על העיקרון של שיטת זיהוי חיסון או אינטראקציה נגד נוגדן. |
| בדיקה | |
| בדיקת DNA חד-גדילית או לפעמים RNA משמשת כגישה. | נוגדנים ראשוניים ומשניים משמשים כגישה. |
| אלקטרופורזה ג'ל | |
| אלקטרופורזה ג'ל Agarose משמשת בכתמים דרומיים. | ג'ל SDS / Polyacrylamide ג'ל המשמש להפרדת חלבונים בסתימת המערב |
| נוהל נקישות | |
| כתמים בדרום עוקבים אחר הליך העברת נימים. | Western Blotting עוקב אחר הליך העברה חשמלי. |
| מדגם | |
| במהלך הקרישה הדרומית, צריך לדלג את הדגימה. | במהלך הקרישה המערבית, המדגם צריך להיות במצבו המקומי. |
| חוסם | |
| שום צעד כמו חסימת אינו מעורב בסתימת הדרום. | במהלך הקרישה המערבית נחסמים אתרי נוגדנים לא ספציפיים על נייר ניטרוצולוזה בעזרת אבקת חלב או אלבומין בסרום שור (BSA). |
| שיטות תיוג | |
| שיטות תיוג נפוצות המשמשות בסתימת הדרום הן שימוש בצבעים כרומוגניים או סימון רדיואציה או תיוג ניאון וכו '. | שיטות תיוג המשמשות בסתימת המערב הן שימוש בנוגדן עם תווית פלואורסצנטית או סימון רדיואליטי, צבעים כרומוגניים או היווצרות דיאמינובנזידין וכו '. |
| שיטות איתור | |
| איתור אור, אוטורדיוגרף ושינויים בצבע משמשים כשיטות גילוי בכתמים דרומיים. | שיטות איתור בכתמים מערביים הן שינויים בצבע וגילוי האור וכו '. |
| יישום | |
| הקרישה הדרומית משמשת לגילוי DNA, בדיקת אבהות, אצבעות DNA, לזיהוי הקורבן, לזיהוי עבריינים, למציאת גורמים זיהומיים ולאיתור מוטציה או הסדרת גנים וכו '. | כתמים מערביים משמשים למציאת מספר החלבונים בתערובת, לצורך איתור נוכחות של נגיף HIV, נגיף וחיידק וכו 'בסרום, כדי לגלות חלבונים פגומים ומשמשים כאמצעי מוגדר להרפס, דלקת כבד B, Lyme. מחלה, ומחלת Creutzfeldt-Jacob וכו '. |
מה זה כתם דרומי?
הקרישה הדרומית היא שיטת הכתמים העתיקה ביותר שניתנה על ידי אדווין דרום וכך נקראה כתם דרומי. הוא משמש כדי לגלות רצף ספציפי של DNA בדגימה או בתערובת נתונות. השלבים הכרוכים במהלך הקריעה הדרומית הם אלקטרופורזה, העברה וגילוי רצפים ספציפיים. ראשית כל, ה- DNA מקוטע בעזרת אנזים הגבלה ספציפי. ואז מופרדים שברי DNA מבוקשים באמצעות אלקטרופורזה ג'ל. שברים אלה מופרכים באמצעות פתרון אלקליין, למשל NaOH וכו 'כדי להפריד בין שני גדילי ה- DNA. שברי DNA אלה חד-גדילים הועברו לאחר מכן על קרום בתהליך הנגיעה. לאחר מכן מטפלים ב- DNA עם גבול הממברנה באמצעות בדיקה מסומנת. בדיקה זו תיצור לחוט המשלים שלה על ה- DNA הממברנה, שניתן לדמיין באמצעות autoradiogram וכו '.
מה זה Western Blotting?
שיטת הקרישה המערבית הומצאה על ידי הקבוצה של ג'ורג 'סטארק מאוניברסיטת סטנפורד המשמשת לזיהוי רצף ספציפי של חומצות אמינו בחלבון. זה ידוע גם כתם חלבון או כתמים בחיסון. השלבים במהלך הקרישה המערבית הם אלקטרופורזה, העברה וגילוי של חלבונים ספציפיים. קודם כל, הומוגניזציה של התערובת. ואז הפרד את מולקולת העניין בעזרת אלקטרופורזה. העבירו מולקולות אלה על הממברנה וזיהו את החלבון הספציפי באמצעות בדיקה ספציפית.
הבדלים עיקריים
- טכניקה המשמשת לגלות רצף DNA ספציפי בתערובת נתונה מכונה נקישות דרומית ואילו טכניקה המשמשת לגלות רצף של חומצות אמינו ספציפיות של החלבון בתערובת נתונה מכונה נקישה דרומית.
- הקרישה הדרומית פותחה על ידי אדוארד מ 'דרום בשנת 1975, המכונה כתם דרומי. מצד שני, הקרישה המערבית פותחה על ידי הקבוצה של ג'ורג 'סטארק באוניברסיטת סטנפורד בשנת 1979.
- כתמים בדרום משמשים כדי לגלות רצף DNA ספציפי. לעומת זאת, כתמים מערביים משמשים כדי לגלות חומצה אמינית או רצף חלבון ספציפי.
- כתם דרומי עובד על עיקרון ההכלאה בצד ההפוך; הקרישה המערבית עובדת על העיקרון של שיטת זיהוי חיסון או אינטראקציה נגד נוגדן.
- DNA בודד עם חוטים או לפעמים RNA משמש כבחינה בסתימת הדרום בצד השני, בנוגדנים ראשוניים ומשניים נוגדנים משמשים כגישה.
- אלקטרופורזה ג'ל Agarose משמשת בכתמים דרומיים ואילו ג'ל SDS PAGE / Polyacrylamide משמש להפרדת חלבונים בכתמים מערביים.
- לעומת זאת, כתם דרומי עוקב אחר הליך העברת נימים; Western Blotting עוקב אחר הליך העברה חשמלי.
- במהלך הקרישה הדרומית, צריך לדלג את הדגימה, ואילו במהלך הקרישה המערבית, המדגם צריך להיות במצבו המקומי.
- אף שלב כמו חסימת אינו מעורב בסתימת הדרום בצד ההיפוך, במהלך הקרישה המערבית, אתרי נוגדנים לא ספציפיים נחסמים על נייר ניטרוצולוזה בעזרת אבקת חלב או אלבומין בסרום בקר (BSA).
- שיטות תיוג נפוצות המשמשות בסתימת דרום הם שימוש בצבעים כרומוגניים או סימון רדיואלי או תיוג פלואורסצנטי וכו '. בעוד שיטות תיוג המשמשות בכתמים מערביים הן שימוש בנוגדן שכותרתי פלואורסצנטי או סימני רדיואציה, צבעים כרומוגניים או היווצרות דיאמינובנזידין וכו'.
- איתור אור, אוטורדיוגרף ושינויים בצבע משמשים כשיטות איתור בסתימת הדרום, ואילו שיטות איתור בכתמים מערביים הן שינויים בצבע וגילוי האור וכו '.
- הקרישה הדרומית משמשת לגילוי DNA, בדיקת אבהות, אצבעות DNA, לזיהוי הקורבן, לזיהוי עבריינים, למציאת גורמים זיהומיים ולזיהוי מוטציה או הסדרת גנים וכו '. לעומת זאת, הקרישה המערבית משמשת למציאת מספר החלבון בתוך תערובת, כדי לאתר נוכחות של נגיף HIV, נגיף וחיידק וכו 'בסרום, כדי לגלות חלבונים פגומים ומשמשים כאמצעי מוגדר להרפס, צהבת B, מחלת ליים ומחלת Creutzfeldt-Jacob וכו'.
סיכום
לעיל הדיון מסכם כי הקרישה הדרומית היא טכניקת הכתמים העתיקה ביותר המשמשת לגלות פלח DNA ספציפי במדגם בזמן שהקרישה המערבית התגלתה אחרונה ומשמשת לזיהוי רצף ספציפי של חומצות אמינו או חלבון ספציפי.
